Środki ostrożności dotyczące probówki do PCR

Elementarz

Startery są kluczem do sukcesu lub niepowodzenia reakcji PCR. Aby zapewnić dokładność i wydajność amplifikacji, projektowanie starterów powinno być zgodne z następującymi zasadami:

Tę samą sekwencję genów w różnych regionach można uzyskać, przeszukując tę ​​samą sekwencję genów w różnych gatunkach za pomocą oprogramowania NCBI

Długość startera: 15-28pz, dłuższa niż 38pz, zwiększy temperaturę hybrydyzacji, co nie sprzyja amplifikacji powszechnego enzymu Taq

Zawartość GC w starterach wynosi 40 procent - 60 procent , a wartość TM najlepiej jest zbliżona do 72 stopni

Ze względu na degenerację kodonu, 3' koniec startera powinien unikać trzeciej pozycji kodonu (najlepiej T)

Rozkład zasad jest rozproszony, z nie więcej niż 3 kolejnymi g lub C na 3 'końcu

Sam podkład nie powinien tworzyć struktury spinki do włosów. Po zakończeniu projektowania podkładu należy go zweryfikować przez śrutowanie